Možete li koristiti serum za izvođenje Western blota?
Iako je moguće koristiti serum za izvođenje Western blota, to se općenito ne preporučuje. Serum je složena smjesa koja sadrži stanice i proteine, uključujući one koji mogu ometati detekciju specifičnih proteina od interesa. Osim toga, serum može imati visok pozadinski signal, što može otežati otkrivanje proteina niske zastupljenosti. Iz tih razloga, pročišćeni uzorci proteina obično se koriste u Western blotovima.
Međutim, u određenim slučajevima može biti potrebno ili korisno koristiti serum za Western blotting. Na primjer, ako je protein od interesa prisutan u maloj količini u pročišćenom uzorku proteina, korištenje seruma može povećati šanse za otkrivanje proteina. Osim toga, serum se može koristiti za proučavanje interakcija protein-protein ili za otkrivanje protutijela protiv specifičnih proteina.
Ako se serum mora koristiti za Western blotting, važno je poduzeti korake kako bi se smanjila mogućnost interferencije i pozadinskog signala. Ovi koraci mogu uključivati:
* Priprema uzorka seruma centrifugiranjem za uklanjanje staničnih ostataka i netopivih čestica.
* Razrjeđivanje uzorka seruma kako bi se smanjila koncentracija ometajućih tvari.
* Korištenje sredstva za blokiranje, poput goveđeg serumskog albumina (BSA), kako bi se smanjile nespecifične interakcije.
* Optimiziranje uvjeta Western blottinga, kao što su koncentracije protutijela i vremena inkubacije, kako bi se smanjio pozadinski signal.
Općenito, iako se korištenje seruma za Western blotting općenito ne preporučuje zbog mogućnosti interferencije i pozadinskog signala, u određenim slučajevima može biti potrebno ili korisno. Pažljivo optimiziranje uvjeta Western blottinga ključno je kada se koristi serum.
