Koji je bolji način za određivanje kada otopina mlijeka postane bistra u eksperimentu s tripsinom?

Određivanje krajnje točke eksperimenta hidrolize tripsina i kazeina promatranjem kada otopina postaje bistra može biti subjektivno i neprecizno. Kvantitativnija i preciznija metoda je uporaba spektrofotometra za mjerenje apsorbancije otopine na određenoj valnoj duljini.

Evo poboljšanog postupka za određivanje krajnje točke eksperimenta s tripsinom pomoću spektrofotometra:

Materijali:

- Otopina tripsina

- Otopina supstrata kazeina

- Otopina natrijevog hidroksida (NaOH) (0,1 M)

- Spektrofotometar

- Kivete

Postupak:

1. Pripremite reakcijsku smjesu:

- U kiveti pomiješajte određeni volumen otopine supstrata kazeina (npr. 1 mL) s odgovarajućim volumenom otopine tripsina (npr. 0,1 mL).

- Inkubirajte smjesu na odgovarajućoj temperaturi (npr. 37°C) željeno vrijeme (npr. nekoliko minuta).

2. Zaustavite reakciju:

- U određenim vremenskim intervalima (npr. svake minute), izvucite mali volumen reakcijske smjese (npr. 0,1 mL) i prenesite je u zasebnu kivetu.

- Odmah dodajte dovoljan volumen otopine natrijevog hidroksida (npr. 1 mL) da zaustavite reakciju.

3. Izmjerite apsorpciju:

- Koristite spektrofotometar za mjerenje apsorbancije svake zaustavljene reakcijske smjese na određenoj valnoj duljini (npr. 440 nm).

4. Nacrtajte apsorpciju:

- Nacrtajte grafikon s vremenom (x-os) i apsorbancijom (y-os).

5. Odredite krajnju točku:

- Analizirajte vrijednosti apsorbancije tijekom vremena. Krajnja točka je vremenska točka u kojoj apsorbancija doseže plato ili pokazuje značajan pad, što ukazuje na opsežnu hidrolizu kazeina.

Ova metoda pruža objektivnije i kvantitativnije određivanje krajnje točke u usporedbi s vizualnim promatranjem bistrenja otopine, budući da se oslanja na mjerenje promjene apsorbancije zbog otpuštanja manjih peptida i aminokiselina tijekom hidrolize kazeina.