Zašto miješanje E Coli s toluenom treba biti lagano?
Razbijanje stanične membrane: Toluen može otopiti lipide koji čine stanične membrane, što dovodi do istjecanja sadržaja stanica i gubitka vitalnosti stanica. Snažno miješanje može povećati kontakt između toluena i stanica, što može dovesti do većeg oštećenja stanične membrane.
Sile smicanja: Snažno miješanje može stvoriti sile smicanja koje fizički oštećuju stanice. Te sile mogu uzrokovati lomljenje ili pucanje stanica, što dovodi do stanične smrti. Nježno miješanje pomaže minimizirati te smične sile i štiti stanice od mehaničkih oštećenja.
Gubitak plazmida: Mnogi sojevi E. coli koji se koriste u laboratorijskim pokusima nose plazmide, male kružne molekule DNA. Plazmidi mogu sadržavati gene od interesa ili markere otpornosti na antibiotike. Snažno miješanje može uzrokovati cijepanje ili gubitak plazmida iz stanica. Nježno miješanje pomaže u očuvanju plazmida i održava željena genetska svojstva soja E. coli.
Smanjena učinkovitost transformacije: Kada se radi s genetski modificiranim sojevima E. coli, često je potrebno uvesti novu DNK u stanice kroz proces koji se naziva transformacija. Snažno miješanje tijekom transformacije može smanjiti učinkovitost unosa DNA u stanice i smanjiti broj uspješno transformiranih kolonija. Nježno miješanje povećava šanse za uspješnu transformaciju.
Poboljšana održivost stanica: Nježno miješanje pomaže u održavanju ukupne održivosti i cjelovitosti stanica E. coli. Stanice sposobne za život neophodne su za razne daljnje primjene, kao što je ekspresija proteina, analiza DNK i funkcionalne studije.
Stoga je nježno miješanje E. coli s toluenom ključno za smanjenje oštećenja stanica, očuvanje održivosti stanica i osiguranje uspjeha sljedećih eksperimenata
