Što je gel elektroforeza

? Gel elektroforeza je metoda odvajanja , identifikaciju i karakterizaciju smjesa proteina ili nukleinskih kiselina . Denaturirani uzorci seliti nakon primjene električne energije u tankom, mokri gela obično izrađena od poliakril ili agarozom . Razdvojeni su uzorci obojeni tako da se mogu vidjeti . Gel elektroforeza proteina koristi se u istraživanju i nukleinskih kiselina , au bolnicama da identificiraju neobična proteina ili DNK uzorke za dijagnozu bolesti, genetska oštećenja i genetskih odnosa . Priprema uzoraka

Kadadeterdžent kao što je natrijev dodecylsulfonate ( SDS ) je dodan protein ili nukleinsku kiselinuse povezati s detergent i razvijati ( denaturiran ) proteina i nukleinskih kiselina . Denaturacije proteina olakšava odrediti molekularnu masu u elektroforezom . Količina uzorka potrebno je obično 100 do 500 nanograma po uzorku sastava proteina i 5 do 100 ng po opsegu na nukleinske kiseline u ukupnom volumenu od približno 25 do 40 mikrolitara .
Gelovi

gel , obično od poliakrilamida ili agaroze , mogu biti pripremljeni ili kupljen odvajanje tih proteina . Gel jepuno poput želatine . To je uglavnom voda , ali je dovoljno čvrsta za rukovanje . Gelovi sadrže pufer za kontrolu pH . Gel je vrlo tanka ( 1 do 2 mm ) i pravokutni . Jedna strana izgleda kao češalj s puno zuba . Praznine nazivaju bušotine .
Nanošenja uzorka

jednog mjestagel u komori s puferom i denaturiranih proteina dodaju se u jažice . Uzorci poznatih molekularnih težina se doda u jažice izvan . Gelovi su izrađene s različitim količinama poliakrilamida . Niska čvrstoća gela ( 4 posto ) je bolje za odvajanje molekula visoke molekularne težine , dok jeveća čvrstoća gela ( 12 posto) koristi se za veće molekule molekularne mase . Gradijent gel varira u jačini gel i može odvojiti široku paletu proteina s gubitkom od otprilike rezolucije .
Elektromigracije

Uz primjenu visokim naponom , denaturirani proteini kretati prema dnu komore. Veća težina proteina , sporije kreće . Kad je struja isključena , proteini prestati kretati . Jedan uklanja gel iz komore i rastura ga u posudu s bojom . Organske boje kao Coomassie blue ili metalnih bojila se koriste za bojenje proteina , dok se fluorescentna boja poput etidij bromid korišten za nukleinske kiseline .
Analiza Rezultati

S uklanjanje viška mrlja , može se vidjeti da su mješavine odvajaju u bendovima koje izgledaju kao ljestve . Položaj vrpci je u odnosu na udaljenost potaknut standardima za određivanje molekulske mase uzorka u svaku traku . Gel se može dehidrirati s alkoholom i suši , tako da se može spremiti . Intenzitet boje benda mogu se mjeriti za određivanje koncentracije proteina u svakom bendu .
Protokol razvoj

Standardni protokoli su dostupni za rad s dobro poznati proteini . Akoistraživač radi s nepoznatom uzorku ,čvrstoća gela , tipa tampon , tampon pH , napon , vrijeme izvođenja , a mrlja se svi trebaju biti optimizirane za dobivanje najbolje odvajanje i signal .
protokoli