Cell Zamrzavanje Protokol
Očuvanje stanice kroz zamrzavanje je bitno za istraživanje , veterinarstva i uzgoj životinja , jer omogućava stanicama da se skladištiti dulje vrijeme . Zamrzavanje metoda odabrana , međutim , mora smanjiti ili spriječiti oštećenja stanica . Zamrzavanje agent i metoda može ovisiti o vrsti stanica . Priprema
Stanice treba zamrznuti kad su zdravi i aktivno raste s 90 posto održivosti . Potrebno je voditi računa o rukovanju i velike brzine centrifuge i snažan pipetiranju ili usisavanjem treba izbjegavati kako bi održali održivost i spriječiti oštećenje stanica .
Krioprotekciji
krioprotekciji agens se koristi kao zamjena za unutarstanične vode . Sredstvo sprječava kristale leda i dehidracije javljaju u stanicama . Sterilizirati glicerol i sterilizirana dimetil se često koriste u koncentraciji od 5 posto do 15 posto ( volumena po volumenu ) razrijeđen u bilo fetalnog telećeg seruma ili medija za rast , ovisno o tipu stanica .
Zamrzavanje i skladištenja
Stanice u smjesi zamrzavanje treba polako hladi . Akoprogramirati zamrzivač nije dostupna , kriobočice može biti omotan u tkivu ili stavljen u stiropor , što može usporiti proces zamrzavanja . Stanice treba držati na minus 80 stupnjeva Celzija za 24 sati , a zatim prebačen u tekući dušik za dugotrajnu pohranu .
Odmrzavanje
Frozen stanice treba odmrznuti brzo . Vodenoj kupelji na 37 Celzijevih stupnjeva može se koristiti . Njega treba uzeti sa stanice pohranjene u tekući dušik , međutim , kako je tekući dušik može ući u bočice i može eksplodirati na odmrzavanja . Smjesa zamrzavanje treba razrijediti u medij za rast . Stanična vijabilnost treba ocjenjivati s bojom trypan plave i stanica uzgajanih kao normalno .
