Infekcijom retrovirusom Protokoli

sadrži RNA genom koji je zatvoren u kapsid i lipidnog omotača , retrovirusi sadrže polipeptidne lance koji pomažu ih povezuju receptore u membranama stanice domaćina koje inficiraju . Dok većini stanica ' nasljedne informacije kodirane u DNA , koji rctrovirusa je sadržana u RNK; retrovirusi također noseenzima reverzne transkriptaze , dopuštajući im da se drže na DNA. Određene protokola slijedi laboratorija u svrhovitom infekcije DNA stanica s tim virusima . Priprema Laboratorija Srpski Srpski

Certain laboratorijsku opremu i zalihe su potrebne za pomoć u procesu retrovirusnom . Oprema uključuje 1 pipeta pomoć , 1 pipeta -čovjek , 1 kulture tkiva napa, 37 stupnjeva Celzijevih i 32 - stupnjeva Celzija inkubatore i centrifugi Eppendorf . Dobavljači su kulture tkiva ploča, za jednokratnu Pasteur pipetu , kvalitetnu retroviralnu supematante , filter - sterilizirana polibrena i filter - sterilizirana protamin sulfat .
Priprema ćeliju za infekcije

Prije infekcije , ciljne stanice se moraju razdvojiti u tkivnim kulturama ploče i inkubiraju preko noći na 37 stupnjeva Celzijusa inkubatoru s CO2 pet posto . Svrha Inkubacija je stvaranje stanice koje su 50 % konfluentne . Pripravljanja stanica prije je potrebno osigurati da se stanice optimizirane za proces infekcije . Nolan Lab na Sveučilištu Stanford preporučuje da infekcije stanica uvijek počinje početak inficiranjem NIH 3T3 stanica kako bi se optimizirati rezultate testa .
Zaraziti Stanice

Nakoninkubacija je gotov, istraživači bi trebali osigurati da stanice su oboje zdravi i desnoj ušća . Pomoću kulture tkiva - napa ,stanični tvar se aspirira ivirusni supernatant je primijenjen na stanicama . Kada primijeniti,ploča bi trebala biti lagano ljuljao naprijed-natrag kako bi se osiguralo da se ravnomjerno raspoređen . Stanice se potom trebaju biti centrifugiranjem inokulirane stavljanjem u centrifugi Eppendorf i njima vrti na 2.500 okretaja u minuti tijekom devedeset minuta na temperaturi od 30 stupnjeva Celzija . Nakon toga , stanice trebaju biti inkubirane na 32 stupnjeva Celzija jedan do dva dana. Virus se tada je zamijenjen s izvađenih stanica i stavljen u inkubator koji će se analizirati bilo tri do sedam dana nakon početne infekcije .