Protokoli za Hoechstovom ostavlja mrlje
Hoechst boje su fluorescentne boje koje se koriste za označavanje DNA i RNA kroz fluorescentnim mikroskopom i tehnike citometrije . Hoechstbr. 33258 i 33342 Hoechstbr. sunajviše koristi od tih mrlja . Oni imaju sposobnost da se vežu na DNA molekule , uzrokujući jezgre i mitohondrije fluorescentne pojavljuju pod ultraljubičastim svjetlom . Protokoli za Hoechstovom bojenja su uobičajena praksa u biotehnološkim i genetika laboratorijima , a uključuju tehnike bojanja stanica pomoću oba HOECHST 33.258 i 33.342 HOECHST . Hoechstbr. 33342 HSC Bojenje i matičnih stanica za pročišćavanje Protokol
Ovaj protokol se koristi za bojanje stanica iz koštane srži miševa . Tehničara pripremu uzorka koštane srži u HBSS + slanom otopinom , HEPES pufera i fetalnog goveđeg seruma . Oni spin rješenje i dodati u zagrijanoj DMEM mediju . Hoechst mrlja zatim se doda . Rješenje se nalazi u 98,6 stupnjeva celzijusa vodenoj kupelji za točno 90 minuta , navodiOdjel za imunologiju na Sveučilištu u Pittsburghu . Segmenti DNK pojaviti fluorescentno pod citometruje .
Hoechstbr. 33342 DNA Bojenje
Tijekom tog protokola , tehničari suspendiran Hoechstbr. 33342 mrlja u destilirane vode , dodajte 2 posto ovčjeg seruma do uzorak stanica , pri čemu se pH na 7,2 pomoću otopine pufera . Stanice se zatim inkubiraju na 98,6 stupnjeva Celzijevih sat vremena , i odmah analizira s komadom opreme pod nazivom citometru .
Stained DNK je onda vidljiva i fluorescentne , u skladu sa Sveučilišta u Michiganu .
DNA detekcije pomoću DNK - obvezujuće fluorokromni HOECHST 33258
protokoli koristi komad opreme nazvan spektrofotometar za analizu DNA i RNA segmente . Tehničari koristiti HOECHST 33.258 izvedivo rješenje i telećeg timusa DNK uzoraka . Oni također napraviti odvojen rješenje pomoću DNK uzorak i kemijske zove etidijeva bromida . Kasnije su usporedili rezultate stanica bojenje u oba medija , koristeći spektrofotometar , prema važećim protokolima u citometrijom .
