Kako se pripremiti ploče agara

Molekularna biologija i bakteriologija korištenje agar ploče za kulture mikroorganizama kao što su bakterije za eksperimentiranje . Agar je sredstvo koje se skrućuje , ili gelovi ,tekućem hranjivom mediju zahtijeva mikroorganizma preživjeti i rasti . Jednom prenese na ploče agara , bakterije rastu na različite kolonija ( ako je narasla na niskim koncentracijama ) ili mrlje ( ako je narasla na visokim koncentracijama ) , a može se prikupe za analizu . Biolozi pripremiti agar , kaoproces zahtijeva pristup laboratorij stupnja reagensa i strojeva i dobro razumijevanje molekularne biologije i sterilnih tehnika . To je ono što vam je potrebno
Rukavice
kuti
maskom
Bunsen plamenik
laminarno strujanje Hood Screenshot sterilne petrijevkama
10g bakto triptona Screenshot 5g ekstrakt kvasca
15g agarnom
1 ml 1M NaOH Screenshot sterilne destilirane vode
Staklena boca
Autoclave tape
autoklavu Screenshot dodataka , npr. antibiotici kao što su ampicilin
Prikazati više uputa
1

staviti na odgovarajuće zaštitne opreme , uključujući i rukavice , a kuti i masku za lice , i dekontaminirati sve površine . Raditi uz Bunsenova plamenika ili , po mogućnosti , u sterilnim laminar flow hood . To sprječava štetne tvari u zraku od pada u agaru .
2

Izvadite snop petrijevkama iz njihove ambalaže , ali spasiti za pakiranje agar. Natpis na vanjsku površinu posudu ( nepoklopca ) s vrstama agara i datum izrade . Položite tanjure kao jednom sloju s poklopcima ukloniti da bi ulijevanja agara lakše .
3

Mix bakto triptona , ekstrakt kvasca i agarnom zajedno, a zatim dodati natrijev hidroksid ( NaOH) . Dodavanje sterilne destilirane vode da se dobije 1L hranjivih medija . Prenijeti ove otopine u staklenu bocu s najmanje 1.5 L volumena . Labavo vijak na poklopcu boce i označiti datum pripreme i ime u medijima . Postavite trakicu Autoclave trake na bocu i sterilizirajte ga za 25 minuta . Nekaboca cool da ne niže od 45 stupnjeva Celzijusa (ili ona će otvrdnuti prerano ) ali ne i više od 50 Celzijevih stupnjeva . Možete pohraniti boca hladi i očvrsnuo agara na 4 Celzijeva stupnja , a zatim toplo dok ukapljeni . Ako je potrebno za određenu eksperimentu ili soj bakterije , dodati odgovarajuću vrstu i količinu dodatka kao što su antibiotici . Akomediji prevruće , dodataka će biti uništena , tako da pažljivo provjerite temperaturu medijima prije nego što nastavite .
4

Ulijte dovoljnu količinu agara na pola napunite posudu , dokje agar još uvijek toplo i tekući . Uvjerite se da jepovršina u potpunosti pokriven . Nemojte sipati pretjeranu količinu ili nekaagar do vrha antene . Imajte na tanjure u sterilnu atmosferu dopuštajućiBunsen plamenik ili laminarni protok neprekidno . Pustiti da se ploče za podešavanje , a zatim zamijeniti poklopce .
5

suši agar ploče za oko 30 minuta do jedan sat u peći postavljena ne više od 37 stupnjeva Celzija . Alternativno , možete ih ostaviti u kvartu laminarnog protoka za tri minuta ili na dekontaminirati laboratorijske klupe u low - prometne površine koja nije propuh za dan ili dva . Sušenje tanjure zaustavlja bilo bakterijske rješenje stavlja na agar podlogu od jednostavno razrjeđivanje van i klizanja , umjesto da formiraju kolonije koje drže agara .
6

pažljivo pohraniti na tanjure umraku i na 4 stupnjeva Celzija . Posložite suhe agar sa svojim dnom kako bi se omogućilo da se jasno vide oznake i kako bi se spriječilo mikroorganizme i krhotine od pada na agar podlogu te ih kontaminira . Stavite posuđe natrag u njihovu ambalažu , pokrijte aluminijskom folijom i trakom za pakiranje za zubima . Označite zapakiranog tanjure sa svojim sadržajem i datum pripreme . Možete pohraniti tanjure za do dva mjeseca i treba ih odbaciti nakon toga .