MBP pročišćavanje Protokoli

MBP ili maltoza obvezujuća proteina nalazi u bakterija Escherichia coli , koja je dio crijevne flore ljudi i životinja . Pročišćavanje MBP uključuje niz postupaka s ciljem razdvajanja sastojaka bjelančevine . U molekularnoj biologiji , pročišćavanje MBP jevitalni proces za proučavanje strukture i funkcije ovog proteina . MBP protokola čišćenja uključuju MBP združenih proteina pročišćavanje , male MBP- fusion i maltoza vezujući protein fusion pročišćavanje tag . MBP sjedinjeni proteini Pročišćavanje

U ovom protokolu , tehničara pranje 20 ml polimera amiloznom smolom s Atris otopinom pri pH 7,4 , natrij klorid , merkaptoetanola ( ME ) i etilendiamintetraoctena kiseline ( EDTA ) , prema protokolima Online . Uzorci stanica se doda , centrifugirani i analizirani elektroforezom na gelu . Uzorci su analizirani u chromatographer gdje tehničara eluat ili promatrati sastojke otopina je dok prolazi kroz kromatografsku kolonu .
Mala skala MBP - fuzijski protein Pročišćavanje

Prema Hebrejsko sveučilište u Jeruzalemu , biolozi koristiti reagens izopropilom bD- 1 - tiogalaktopiranozid ( TG ) , kulturu spina stanica za 10 minuta na 8000 okretaja u minuti na 39,2 stupnjeva celzijusa . Kasnije , se ukloni supernatant i tekućina se miješaju hladnim PBS puferu uzorka , koja je podijeljena u nekoliko cijevi i ponovno centrifugira . Uzorci se potom zadržao na -112 stupnjeva celzijusa za stražnje analize .
Maltoza obvezujuća proteina Fusion Tag Pročišćavanje

Afinitetni genetski projektirana molekule zaposleni u molekularnoj biologiji za otkrivanje i pročišćavanje proteina . Ovaj protokol jesložen skup postupaka podijeljen u tri faze , koja uključuje izgradnju polihistidin proteina protivnička igrača ( HisMBP ); pilot pokus za procjenu topljivost proteina; ipročišćavanje velikih MBP molekula , prema prirode protokolima . Osim E.coli uzoraka , tehničari koristiti ampicilin , kanamicina , TG , anhydrotetracycline , glukoza monohidrat , lizu stanica tampon , DNA polimeraze , PCR početnice , Tris - acetat - EDTA i etidijeva bromida .