Adherentne stanice Protokol

stanica u kulturi su bilo oblik uzgojene u suspenziji , kao što su krvne stanice , ili stanice , kao što su fibroblasti zahtijevaju površinu na kojoj se mogu pridržavati . Neki od površina može zahtijevati premaz u različitim izvanstaničnog matriksa , ovisno o tipu stanica i studija . Svi stanične kulture zahtijevaju da se izvodi su aseptičkim uvjetima . Optimalne uvjete

Većina tipova stanica može biti uzgajane su u Dulbeccovom modificiranom Eagleovom mediju ( DMEM ) i Roswell Park Memorial Institute ( RPMI ), uz dodatak od 10 posto fetalnog telećeg seruma , 2 milimoles o aminokiseline glutamina i antibiotika , na primjer , 100 jedinica penicilina i 0.1 mg po mililitru streptomicina . Stanice se čuvaju u svojim medijima u vlažnom inkubatoru na 37 stupnjeva Celzija , a 5 posto ugljičnog dioksida .
Cijepanje

Stanice treba provjeriti dnevno za infekcije , smrti ili rast . Nakontikvici za kulturu tkiva je 80 posto presvučeni u stanicama , stanice bi trebao biti podijeljen na održavanju zdravlja stanica, a te fazu rasta dnevnik . Medij se ukloni i stanice se isperu u fosfatno puferiranoj fiziološkoj otopini . Adherentne stanice zahtijevaju dodatak tripsina i etilendiamintetraoctene kiseline ( EDTA ) da se ukloni stanične adhezije proteina . Nježna uznemirenost treba ukloniti stanice . Mediji treba dodati da neutralizira tripsina /EDTA rješenje .

Precjepljivanje

Razblaženi stanice i tryspin /EDTA rješenje može se centrifugira u talog i oprati stanice . Stanice se resuspendiraju u mediju i razrijedi i rasporede na nove tikvice . Svaki put kada se stanice dijelebroj stanica prolaz je povećan za jedan .
Medijske promjene

Media treba mijenjati dva puta tjedno uklanjanjem starih medija i zamjene s nova , grijao medije .