Kako Mjera stanična vijabilnost

U većini bioloških eksperimenata koji uključuju kulturu stanica ,ključan korak uključuje znajući što su stanice žive i koji su mrtvi u svom uzorku . Dye Isključenje jenajpopularnija metoda mjerenja preživljavanja stanice . Dye isključenje temelji na teoriji da žive stanice sadrže netaknut membrane i mrtve stanice ne , tako mrtve stanice upijaju boju u citoplazmi . Postoje različite boje i protokole i metode koje ste izabrali bi trebao biti temeljen na cijeni, osjetljivost , jednostavnost i duljinu postupka . Tripansko plava jeuobičajena boja koja se koristi za mjerenje preživljavanja stanice , jerse postupak može obaviti u pet do 10 minuta , a košta samo iznos boja reagensa . To je ono što vam je potrebno
0,4 % trypan plavom reagensa
hemacitometru Screenshot Cover slip
mikropipetu Screenshot pipete
fosfata (PBS )
svjetlosnim mikroskopom

Prikaži više uputa Screenshot
1

dobio pelet stanica koju mjernih .
2

Resuspendiranjepelete stanica u PBS-u kako bi dobili oko 5 x 105 stanica /ml . PBS se koristi jer mjerenja održivosti su točniji kada su stanice u okruženju bezserumskom ; serumske proteine ​​mogu također obojiti i dati pogrešne rezultate .
3

dodati jednake dijelove stanične suspenzije u PBS-u na jednake dijelove 0.4 % Tripan blue bojom da bi se dobio 1 do 2 za razrjeđivanje ( primjer : . 100 ul stanica u 100 ul tripan plavo) i miješati s pipetom i dolje
4

Inkubirati smjesu za manje od tri minute na sobnoj temperaturi . Ako se stanice se izbroje Nakon oko pet minuta , vijabilnost biti netočne zbog smrti stanica .
5

S cover slip već na mjestu , ispuniti svake strane hematocitometra brojača sa staničnom suspenzijom . Obično svaka strana će potrajati 10 do 20 Ul.
6

Postavite hematocitometra na pozornici svjetlosnim mikroskopom i usredotočiti se na stanicama .
7

svakoj strani hemacitometru sadrži više kvadrata . Brojati ukupan broj stanica u jednom kvadratu hemacitometru . Tada brojati broj neodrživih (plavo) i život ( Slobodan) stanice odvojeno , u istom trgu .
8

Izračunajte postotak živih stanica na trgu dijeljenjem broja živih stanica po broju ukupnih stanica i pomnoži sa 100. . Učinite to za više kvadrata na hemacitometru dobiti prosječnu mjerenje održivosti .