Western blot uporabu

Western blot analiza je dobro poznata tehnika za identificiranje specifičnih proteina izoliranih iz tkiva . Različiti proteini prvo su razdvojeni naboja i mase na SDS - poliakrilamidnom gelu i prenese na nitroceluloznu membranu . Nakon prijenosa , obilježena protutijela specifično vežu sa željenim proteinom i fotografirani pomoću rendgen filmu ili vizualizirani proteina specifičnim mrlja . Konačni rezultat pokazuje tamne bendova koji ukazuju na prisustvo identificiranog proteina . Ovaj članak se fokusira na temeljne metodologije za obavljanje Western blot analizom u laboratoriju kvalificirala za složene istraživanja proteina . To je ono što vam je potrebno
SDS - poliakrilamidni gela ( SDS - PAGE ) s odvojenim proteina Pretraživati ​​Nitrocelulozni membranski Screenshot destiliranom vodom
Transfer tampon ( 30 g Tris , 144 g glicinskim i 200 ml metanola u 1 l voda)
Filter papir , Whatmanov 3 mm
Laboratorij spužva
Western blot prijenos komora Screenshot, Laboratorij za napajanje
Laboratorij Hladnjak Screenshot Laboratory agitatora
Tris puferiranom fiziološkom otopinom (TBS) ( 24,2 g Tris baze , 80 g NaCl u 1 l vode )
Blokiranje rješenje ( 5 posto nemasno mlijeko u prahu u TBS )
Primarni rješenje antitijela
obilježeno antitijelo konjugirano rješenje
Alkalna fosfataza podloga rješenje s nitro plava tetrazolium mrlja
fosfata (PBS ) Srpski gel - Imager okvir