Protokoli za biotiniliranje
biotinilacija je proces povezivanja biotin ili vitamin H , s proteinom ili drugih molekula . Ovaj znanstveni postupak se uglavnom koristi u biotehnologije i molekularne biologije istraživanja uključuje DNK , proteine i antigene , koji su molekule imunološki sustav prepoznati kao uljeza . Biotinom protokoli uključuju biotinilaciju antitijela i peptida , kao što su površine stanica biotinilaciju . Biotinilacije antitijela
Za povezivanje biotina proteina antitijela proizvode antigen kadauđe u tijelo , tehničari koristiti natrijev bikarbonat ( NaHC03 ) , na pH 9 , dimetilsulfoksid ( DMSO );
NHS biotin i slane tvari zove PBS . Uzorci su pomiješani s otopinom natrijevog bikarbonata , koji se kasnije dodaje NHS -biotinom u DMSO . Otopina se onda dodaje u analiziranim antitijela i inkubirano na komad opreme zove okretaljka četiri sata na sobnoj temperaturi ili preko noći na 39.2 stupnjeva celzijusa . Konačno ,otopinu se razrijedi s PBS .
Stanične površine biotinilacija
biotinom protokolu površini stanice , tehničari koristiti kulture tkiva , fosfat - puferiranoj fiziološkoj otopini ( PBS ) u pH 7.4 i sulfosukcinimidil - 2 - ( biotinamido ) etil - 1 ,3 - ditiopropionatom otopina pufera za uravnoteženje kiselost sadrže amino skupine i TrisCl prema Current Protocols in Protein Science.The stanice su pomiješane s biotinom i puferske otopine , dekantira i centrifugirane . Čvrsta Sadržaj i specifični proteini kasnije su analizirani na gel elektroforeza tanjuru .
Biotinilacija peptida
Za obavljanje biotinilaciju peptida ,reagens koristi NHS - SS Biotin , prema Philip Pastira u " monoklonskih antitijela : .praktičan pristup" Kratki peptidi su fragmenti aminokiseline molekule koje tvore proteine i DNA . U ovom protokolu , komercijalna otopina NHS - biotin SS se otopi u vodi . Zatimpeptid uzorak je dodan to , zajedno s natrijevim bikarbonatom na ravnotežu kiselosti ili pH . Otopina se zatim inkubira na ledu tijekom dva sata . Tehničari mogu promatrati uzorak sa ili bez biotinom molekula .
