HPLC Tehnika

HPLC stoji za tekuće kromatografije visokih performansi , standardni kvalitativne i kvantitativne postupak analize koji se koristi u analitičkim laboratorijima . HPLC je pouzdan i ponovljiv , koja jepoželjna tehnika za odvajanje , identificiranje i kvantificiranje molekule iz složenih smjesa u kemijskim i biološkim komponente čini . Četiri komponente

HPLC tehnika sadrži četiri glavne komponente . Prvo ,otapala sustav za isporuku (pokretna faza ) , koja nosi uzorke kroz kolonu , važno je , kaopolaritet utječe na sposobnost sustava da se razdvoje molekule . Kromatografija je običnostaklo vertikalni stup koji je ispunjen s adsorbenta . Drugi ,adsorbenta ( također poznat kao stacionarna faza , jer ne pomiče ) je uobičajeno silika gelu ili glinici . Treće,unošenje uzorka sustav sastoji od neke vrste priključak za ubrizgavanje za uvođenje uzorka se analiziraju u sustavu otapala za isporuku . Četvrta komponenta jedetektor .

Detektori

vrsta detektora koristiti ovisi o vrsti uzorka tehničari su trčanje i što molekule oni pokušavaju izolirati . Kriterijitehničar koristi pri odabiru detektor uključuje selektivnost , signal - šum , granica detekcije, linearni niz , vrijeme konstanta, drift i volumen stanica . Često korišteni detektori su ultraljubičaste - vidljivi detektore maseni spektrometri , indeksima loma , fluorescentna detektora ili evaporirajućeg raspršivača uređaja .
Postupak

Uključite detektor , crpke ( koje se koriste za dodavanje pritisak da se krene s protočnim kroz stacionarnu fazu ) , aračunalo koje će snimiti i ispisati kromatograma . Odaberite odgovarajuće programe kako bi se prikupili željene podatke . Ubrizgati uzorak u priključak za ubrizgavanje . Držati oko na pritisak . Svaka vrsta stupca ima maksimalni pritisak; ne prelazi ovaj ili razdvajanje neće dogoditi . Ispis iz kromatograma i analizirati rezultate . Na kraju svake vožnje , važno je da se istjerati ubrizgavanja luku kako bi se spriječilo nakupljanje , što može stvoriti blokade .

Vrste

Hidrofilan se kromatografija koristiprešano polarni stacionarna faza inepolarne , miješa s vodom mobilne faze za razdvajanje molekule na temelju polarnosti . Ta tehnika ima mogućnost odvajanja kiselih , bazičnih i neutralnih uzoraka u jednom chromatogram.Normal fazom koristi polarni stacionarnu fazu i nepolarni bezvodni protočnim sredstvom za odvajanje strukturne izomere (molekule u istu molekulsku formulu, da su atomi zajedno različite načine ) . reverzne faze kromatografije je najčešće korišten oblik HPLC . Koristi nepolarni stacionarnu fazu i vodenu nešto polarniji mobilne faze . Ova metoda se često koristi od strane farmaceutske tvrtke kako bi se kvalificirali droge prije release.Size isključenje kromatografije razdvaja molekule na temelju njihove veličine , a također može odrediti strukturu proteins.Ion razmjene kromatografije temelji na privlačnosti između iona u otopljene tvari i nabijena mjesta vezan na stacionarnu fazu .
Koristi

HPLC je korisno u različitim aplikacijama . Ona se može koristiti za analizu farmaceutskih materijala , što je korisno u istraživanje novih farmaceutskih i pročišćavanje postojeće. Također se koristi za analizu bioloških tekućina , pesticida, eksploziva i druge materijale . Iako jepopularna tehnika za biomedicinske , biokemijske i farmaceutske istraživanja , što je također koristi u kozmetici , hrane, zaštitu okoliša i energetske industrije .