N terminalno sekvenciranje Protokol

Edman razgradnje -poznati postupak za prepoznavanje N - terminalne amino-kiseline proteina - zahtjeva cijepanje amino kiseline , nakon čega slijedi identifikacija pomoću kromatografije ili elektroforezu . Automatizirani proces ubrza N - terminalno sekvenciranje . Činjenice

proteini unutar pojedine stanice djeluju kao hormona , enzima i drugih važnih regulatora . Genetska mutacija rezultira nenormalno proteina može imati ozbiljne zdravstvene posljedice .
Postupak

N - terminalne amino kiseline odcjepljuje se obradom s jednim od više reagensa , a zatim hidrolizira da formira zasebnu aminokiselinu . Tankoslojna kromatografija , HPLC ili elektroforeza određuje veličinu amino kiseline , i to usporediti s poznatim standardne veličine . Nova N - terminalni kraj ostatka proteina može se isto cijepati za identifikaciju .

Automatizaciju

Applied Biosystems dovela razvoj automatizaciju Edman razgradnje , koje veže pročišćenog proteina u membranu i tretira s fenilizotiocijanat . Slobodna amino kiselina je automatski ubrizgava u sustav HPLC za identifikaciju .
Komplikacije

Proteini mora ostati relativno čist i slobodan od zagađivača točno odrediti N - terminalnu amino kiselinu . Edman ograničenja razgradnje zahtijevaju velike molekule proteina rascjepkano u male peptidnih lanaca više nije 50 aminokiselina .