Zašto ste morali prati bunare nakon svakog koraka?

Pranje jažica mikropločice nakon svakog koraka u različitim biokemijskim i molekularno biološkim testovima kao što su ELISA (enzimski imunosorbentni test), izolacija DNA/RNA, PCR i Western Blotting bitan je dio eksperimentalnog protokola. Svrha koraka pranja je uklanjanje zaostalih reagensa, komponenti reakcije ili bilo kojih kontaminanata koji bi mogli ometati sljedeće korake ili utjecati na točnost i specifičnost analize.

Evo nekoliko razloga zašto su koraci pranja potrebni:

Uklanjanje nevezanih tvari: Koraci ispiranja nakon dodavanja reagensa ili protutijela pomažu u uklanjanju svih nevezanih tvari, poput viška protutijela, nespecifičnih veznih molekula ili reakcijskih komponenti koje nisu uhvaćene ili vezane na čvrstu fazu. To osigurava da je signal detekcije specifičan i bez pozadinskih smetnji.

Minimiziranje unakrsne kontaminacije: Koraci pranja učinkovito smanjuju rizik od unakrsne kontaminacije između uzoraka. Ovo je osobito važno kada se više uzoraka obrađuje istovremeno, jer sprječava prijenos reakcijskih komponenti ili kontaminanata iz jedne jažice u drugu. Pranje pomaže u održavanju cjelovitosti i točnosti rezultata pojedinačnih uzoraka.

Učinkovito uklanjanje ometajućih tvari: Pranje je potrebno kako bi se uklonile tvari koje bi mogle ometati sljedeće korake. Na primjer, u ELISA testu, ispiranje pomaže eliminirati nevezane komplekse konjugat-antitijelo, čime se smanjuje razvoj pozadinske boje i povećava specifičnost kolorimetrijske reakcije. U PCR-u, pranjem se uklanjaju nukleotidi, početnice i polimeraze iz prethodnih ciklusa amplifikacije, smanjujući rizik od prijenosa kontaminacije i osiguravajući točno pojačanje u sljedećem ciklusu.

Standardizacija i ponovljivost: Slijedeći standardizirane postupke pranja, istraživači osiguravaju da su uvjeti dosljedni u svim eksperimentima i između različitih laboratorija. Ova dosljednost je ključna za dobivanje pouzdanih i ponovljivih rezultata.

Postupak ispiranja može uključivati ​​korištenje višekanalne pipete ili automatiziranog perača ploče za doziranje i aspiraciju pufera za ispiranje. Pufer za ispiranje obično je puferirana fiziološka otopina koja sliči sastavu izvornog pufera korištenog u analizi, ali ne sadrži nikakve reakcijske komponente.

Adekvatno pranje bez pretjeranog pranja je ključno. Pretjerano ispiranje može rezultirati gubitkom bitnih komponenti vezanih za čvrstu fazu i utjecati na osjetljivost testa. Stoga su protokoli pranja pažljivo osmišljeni kako bi se postiglo optimalno uklanjanje neželjenih tvari uz očuvanje cjelovitosti imobiliziranih molekula ili analita od interesa.