Tissue Culture savjeta

tkiva kultura je širenje stanice u tekućem mediju za rast u laboratoriju za razne znanstvene svrhe . Na primjer , kultura tkiva koriste se u dijagnozi genetske bolesti , kao što je medij za uzgoj unutarstaničnih patogena, kao što su bakterije i virusi ili u istraživanjima u same stanice . Kultura tkiva Stanice

Neke stanice se lijepe na dnu Petri jela ili ostati suspendiran u tekućini . Stanice mogu biti od biljnog ili životinjskog podrijetla . Stanice korištene u kulturama tkiva mogu biti primarne stanice , što znači da su sakupljene izravno iz organizma , ili stanične linije koje su održavane u kulturi . Stanične linije često su stanice raka , i to treba uzeti u obzir prilikom planiranja i tumače eksperimente .
Priuštite Cells Nježno

Prihvaćene stanice su uklonjeni sa svojih petrijevku za prolaz prema struganje ili s proteazom , općenito tripsin EDTA . Struganje ubija mnoge stanice i treba koristiti samo kada se priprema stanični lizati ( tekući pripravci sadržaja stanica za analizu ) ili kada je apsolutno potrebno je izbjegavati tripsina /EDTA .

Trypsinizing uklanja ne samo proteine ​​koji odgovaraju stanice za jelo ali većina ostalih proteina na membrani stanica , previše . Stanice loptu i uzeti neko vrijeme , obično preko noći , ponovno uspostaviti vezu s antenom . Dodavanje minimalnu količinu tripsina - oko 1 ml za 25cm2 boci - ljulja tikvicu pet sekundi ili manje za oblaganje monosloja te izlijevanjem isključivanje ili isisavanja višak tripsina će smanjiti količinu tripsina na kojimonosloj je izložena . Neka stanice odmoriti u inkubatoru tijekom tripsinizacijom .

Nakon stanice slajd s dna posude , dodajte medije sa serumom i aspirirati lizat gore i dolje na kapaljku nježno. Dopustiti malo medija da ostane u posudi kao što kapaljku gore i dolje nekoliko puta break apart razredi i dobiti čak i ovjes .

Nemojte sisati mjehurića u kapaljku . Isto tako , nemojte snažno miješati ili vrtložne Suspenzija stanica; stanice su vrlo krhke u ovom stisnuo - up države .
za zagrijavanje onesposobljavaju ili ne Zagrijte onesposobili

Kad Kultura stanica tehnike bile u povojima , fetalnog goveđeg seruma ( FBS ), je poznato da sadrži komplementarne proteine ​​koji su imunološki sustav proteina koji stanice su lizirane . Komplementarne proteine ​​nisu poželjni u staničnoj kulturi . Toplinski dezaktivira FBS na 56 stupnjeva Celzija 30 minuta će uzvratiti komplementarne proteine ​​neaktivnih . Prewarming FBS do 37 stupnjeva C također je dovoljno za deaktivaciju komplementarne proteine ​​.

U ranim danima , toplina inaktivirajuši FBS i ubio mikoplazmičnih i drugih onečišćivača . U to vrijeme , filter sterilizacija izvršena je u 0.45um filtera . Danas , filtriranje smo sterilizaciju FBS i medija kroz 0.1um ili čak 0.04um filtera . Ne mikoplazme će se provući da

To nam ostavlja na pitanje hoće li se zagrijale inaktivacija

inaktivacije degradira sve komponente FBS - . . Kao što su vitamini , aminokiseline i faktora rasta - . eventualno ispod praga za neke izbirljiv staničnim linijama

Ako radite s stanične linije sporo raste ili izbirljiv , samo razmislite filtriranje sterilizaciju svoje FBS . Možda će vam to povećava robusnost vaših stanica .