Metode za mjerenje NADPH oksidaze

enzim NADPH oksidaze je identificiran kao proizvođač reaktivnih vrsta kisika tijekom procesa , uključujući rast vaskularnih glatkih mišićnih stanica . Te reaktivne vrste su povezane s nizom bolesti uključujući hipertenziju , dijabetes , upale i rak , metode za praćenje aktivnost ovog enzima je kritična za mogući razvoj liječenja . NADPH oksidaza

NADPH oksidaze pripada obitelji enzima koji pomažu u prijenosu elektrona između NADPH i kisika . Međutim , NADPH oksidaze ima jedinstvenu sposobnost proizvodnje reaktivne vrste kisika iz ove reakcije , u odnosu na druge članove obitelji , gdje reaktivni kisikovi se generira putem drugih sredstava . Multimernog proteina kompleks , NADPH oksidaze sastoji od membranski vezanog flavocytochrome b558 , koji se koristi kao mjerni marker.
Reaktivnih vrsta kisika ( ROS ) Generation

glavni izvor ROS , osobito vodikov peroksid , NADPH oksidaze proizvodi male količine , ali trajnu putem svojih izoformnoj izražene u krvnim žilama , koji su uključeni u procese signalizaciju . Ovaj dosljedna proizvodnja na kraju može preplaviti prirodni antioksidans sustav , uzrokujući gubitak zaštitnih spojeva poput dušikovog oksida , tegeneracija još snažniji ROS .
Kemiluminescencija Metoda

Kemiluminescencija omogućuje vrlo osjetljivi , automatizirano mjerenje NADPH oksidaze preko raspona koncentracije . Tijekom ovog postupka , NADPH supstrat je dodan u uzorak tkiva sadrži NADPH oksidaze . Nakon reakcije , ROS se stvara i reagira sa spojem lucigenina proizvesti učinak chemilluminescent koja se mjeri . Luminescencija je izravno proporcionalna NADPH oksidaze , kao što je enzim određuje brzinu reakcije .
Kinetička Test putem protočnom citometrijom

U ovoj metodi , uzorci tkiva su analizirani putem protočne citometrije . Koštana srž je odvojen iz uzorka pomoću Hanksovoj balansiranoj otopini soli . Specifični mrlje i detektirajućih antitijela su dodana u uzorak u polistirenskim epruvetama . Uzorak se zatim inkubira , ispere s Hanks Balanced Salt Solution , označen s Molecular Probes i pripravljen iz protočne citometrije . Kontrolne šipke su također napravili za usporedbu i za kalibraciju protok citometru . Uređaj tada je vodio i mjerenja zabilježeno .