PCR Osnove
lančana reakcija polimeraze ( PCR ) senačin replikacije DNA . Metoda je nazvana DNA polimeraza enzimom , kako bi se katalizirala procesa replikacije DNA . Kary Mullis razvili tehniku u 1984 i dobio Nobelovu nagradu za kemiju za svoj rad u 1993 . Primjena PCR
Uobičajene primjene PCR uključuju analiza DNK ( u kojima DNK fragmenti su izolirani i odnosu prema postojeće podatke ) , analiza iznimno malom uzorku iznosa ( koji omogućuje znanstvenicima da rekonstruiraju izumrlih organizama i preminulih povijesnih ličnosti ) i dijagnoze bolesti ( uključujući i virusnu DNA i istraživanje raka ) .
PCR Komponente
potrebne komponente i reagensi za PCR reakcije su : genomske DNA (predložak ponoviti ); Dva primera ( jedan naprijed i jedan natrag) komplementaran DNA sekvence predloška; reakcije koktel ( uključujući Taq polimeraze i tampon rješenje koje pruža održiv okruženje u kojem će se pojavitireakcija ); isupstrat za enzim Taq ( nukleotidi koji će vam pomoći "graditi " pojedinačne vlasi ) .
Koraci PCR
Nogostupi su reakcije : denaturacija ( pri čemu se temperatura podigne na odvojene trake templata DNA ); Kaljenja premaz ( tijekom koje se temperatura ohlađenog potaknuti slobodnolebdeće primerskih sekvence pridržavati izolirane DNA uzorci nitima ); i proširenju ( tijekom kojeTaq polimeraze pridržava premaz i koristi free- floating nukleotida ponoviti svaki izolirani DNK predloška cjedilu ) . Taj proces ponavlja nekoliko puta će izolirati svaki replicirati slijed od svoje izvorne DNA kalupa . Svako ponavljanje eksponencijalno povećava količinu replicirati DNK dok postojidovoljna količina za željeni eksperiment . Za optimalnu temperaturu i druge uvjete , vidjet Yale University -a "Projektiranje PCR programe" u Resources , u nastavku .
Faze PCR
reakcija može se opisati u tri faze : Pojačanje ( tijekom koje DNA eksponencijalno se replicirati ); Level - off ( tijekom kojeTaq polimeraze gubi aktivnost ); i plato ( nakon čega više proizvoda može se proizvesti u tekućem reakciji ) . Na interaktivnom demonstraciju PCR reakcije , vidjet Sveučilišta Utah je " PCR Virtual Lab " u Resources , u nastavku .
