Kako se postroje DNK za analizu

? Agaroza gel elektroforeza jenajčešći način vizualnom DNK analize ulomaka , koji omogućuje tehničarima da vizualno razabrati DNA fragmenata na temelju veličine . Agaroznom gelu održava magnetsko polje , a budući da DNK ima negativan naboj , seli prema pozitivnom kraju magnetskog polja . Manji DNK fragmenti brže kretati kroz gel i veći ulomci kretati sporije . DNA fragmenti su obojene s fluorescentno interkalirajuće agensom kao etidij bromidom . To omogućava usporedbu više Elektroforezirani uzoraka DNA na gel . Ono što vam treba
agaroznom gelu , 0.7 posto do 2 posto
Tris - borat - EDTA ( TBA) , tris - acetat - EDTA ( TAE ) , natrijev acetat litij ( LA ) , borne kiseline ( SB ) pufer
etidijeva bromid
gel za utovar Dye Screenshot gel ladica
elektroforicki Doma Screenshot Rukavice
Zaštitna oku nositi
pipetu koja Screenshot elektroforeze češalj
pokazati više Uputstvo
Priprema za 0,7 posto Agaroza gel
1

odvagati 0,7 grama agaroznog u prahu , a zatim stavite u veliku ( 250 ml ) stožasti tikvicu .
2

Dodaj 100ml od 1X ( regularna snaga ) tampon ( TAE , KME, SB ili tampon LB ) u količnu posudu sa agaroznog prah .
3

Mikrovalna pećnica ili topline pomoću Bunsen plamenik za oko jedan minuta dok otopina postaje jasno iagarnom je raspušten .
4

Izvadite tikvice od izvora topline i pustite da se ohladi na 55-60 stupnjeva Celzija .
5

Dodati 1 ul ( mikrolitar ) etidium bromida u ohlađenu otopinu agaroznog pomoću odgovarajuće veličine pipete, obično 1 ml . Vrtlog rješenje miješati .
6

Ulijte gel polako u ladici gel , čime se osigurava da nema mjehurića tijekom ovog procesa . Ako nema isporučio dobro brane sa ladici gel , koristite samoljepljiva traka ih čine .
7

Postavite elektroforicki češalj pažljivo u gel , osiguravajući čvrstu poziciju i na ispravnu orijentaciju . Elektroforeza češljeve se uvelike razlikuju o broju zubi imaju. Dopustitegel postaviti za otprilike 25 minuta
8

Uronite gel u istom puferu koristi za pripremu agaorse rješenje - . Je u ovom slučaju , 1x tampon . Uronite u gel do 5 ml trčanje tampon .
Priprema i utovar DNA u agaroznom gelu, koji za analizu
Srpski 9

Transfer 5-10 j.L vaš uzorak ( i) iz njihovih reakcija cijevi do svježeg cijevi . U slučaju da želite koristiti cijeli Smjesa ,svježe cijev nije potrebno .
10

Dodaj 0.2X učitava tampon za svaki od vaših svježe epruvete uzoraka koji sadrže svoj ​​DNK uzorak za utovar .

11

Izvadite elektroforicki češalj polako , pazeći da ne razbiti gel ili stvoriti bilo koji prostor između dnu gela i ladice gel .
12

Dodaj pet 12 ul odgovarajućeg DNA marker za prvi i stvorio elektroforeze češlja . Hoće li ili nemarker DNK je prikladno ovisi o veličini fragmenata što se očekuje od svog uzorka .
13

Load pet do 10 jal svoje uzorke u preostale bunara i dodatijednaka količina istog DNA biljega u završni dobro .
14

postavite elektrode u elektroforetskog komori uključivanjem žice u ispravne utičnice u komoru i postaviti elektrode na 50 do 150 V.

15

Dopustitegel za trčanje za jedan do četiri sata .
analiza rezultata

16

Izvadite gel od gela komore i staviti ga bilo u UV sobi za vizualne identifikacije , odnosno mjesta na stroju koji je u stanju fotografirati gela .
17

Izmjerite termene udaljenost od migracija u svojim bunarima .

18

zemljište udaljenosti protiv veličini bendova na semilogaritamski milimetarskom papiru i izvući najbolje pristaje liniju .
19

Izračunajte udaljenosti vaših nepoznatih bendova .

20

Procjena veličine vaših nepoznatih bendova crtu gore od udaljenosti putovao po svojim nepoznatih bendova koji zadovoljava liniju najbolje odgovara .
21

Draw drugu liniju iz ovog stjecištu više na veličinu osi .