Označavanje antitijela Postupci

postupci obilježavanja protutijela su tehnike koje se koriste u znanosti biološkim detektirati prisutnost specifičnih molekula . Ovi postupci koriste odnos antigena i antitijela . Antigeni mogu biti bilo koja molekula kojaprepoznaje imunološki sustav . Antitijelo je Y - oblika proteinakoji specifično prepoznaje jedan antigen . Biolozi korištenje odnos između vezanja protutijela i antigena odrediti lokaciju specifičnih molekula u uzorku . ELISA

ELISA , ili enzimski vezanog imunosorbentnog ispitivanja jeBiological Laboratory tehnika za otkrivanje prisutnosti antigena ili antitijela . Često se koristi u medicinske dijagnoze kako bi se utvrdilo je lipacijent je izložen određenom tipu infekcije .

Za izvođenje ELISA ,uzorak — sadrži antigen kamatne — je učvršćen na čvrste potpore u posudu . Otopina s komplementarnim antitijela se dodaje u posudu , te se protutijelo veže na antigen . Suvišak antitijela zatim se ispire , ostavljajući samo antitijela vezanog za antigen para u posudu . To mogu biti vizualizirani dodatkom fluorescentnu molekulu koja se veže na antitijela i ispušta vizualni signal , koji se zatim može se kvantificirati . Na ovaj način ,prisutnost i količina antigena interesa može se posredno odrediti .
Western Blot

Westernblot jedrugačija vrsta tehnike koriste za otkrivanje proteina u uzorku , a određuju veličinu . Prvo , uzorak proteini su raspoređene po veličini na gelu koristeći gelne . U ovom trenutku , proteini nisu vidljivi golim okom . Znanstvenici zatim prijenos proteina u membranu i dodati u otopinu koja sadrži antitijela za antigen od interesa . Nakon ispiranja višak otopine ,antitijelo se veže za antigen na membrani .

Dodavanjem sekundarnog antitijela uzrokuje izvorni , ili primarni , protutijelo se emitiraju svjetlo . Određivanja količine svjetla koje emitira omogućuje istraživačima kako bi se utvrdilo prisustvo antigena , njegova veličina u usporedbi s drugim proteinima i relativne koncentracije .
Imunohistokemija

Imunohistokemija je tehnika koja omogućuje istraživači predočiti mjesto proteina u uzorku tkiva . Mali kriške uzorku su pripremljeni iprimarnog antitijela , koji se veže na antigen od interesa , se doda . Višak rješenje je odnijela prije dodaju istraživači sekundarnog antitijela . Ovo antitijelo se veže primarno antitijelo - antigen para i emitira svjetlo , signalizirajući mjesto antigena od interesa .

Znanstvenici pomoću mikroskopa za vizualizaciju u kojimaje antigen u stanici . Više različitih antitijela , svaki specifični za određeni protein , mogu se koristiti za određivanje relativnog položaja nekoliko molekula u stanici . Ako je tocilj , različite boje sekundarna protutijela se koriste za razlikovanje između različitih molekula interesa .
Flow Cytometry

Fluorescentna stanica aktivirano razvrstavanje — ili FACS — je vrsta protočnom citometrijom koristi za odvajanje različitih tipova stanica u otopini . Svaki drugačiji tip stanica je " označeni " s antitijelima specifičnim za taj tip stanica . Svaki od ovih antitijela emitira različite boje svjetlosti . Stroj uzburka rješenje da ga razbiti u pojedinim kapljice i koristi senzor za otkrivanje boju svaki kapljica . Uređaj sortira stanicama emitiranog boji , ih dijeli na temelju vrste proteina koje sadrže . FACS metodologija omogućuje istraživačima za sortiranje i kvantificirati stanice od interesa za svoje istraživačka pitanja .
Immuno - elektronska mikroskopija

Normalno elektronskim mikroskopom omogućava znanstvenicima ispitati strukturu stanice povećati i do 1 milijun puta . Imuno - elektronska mikroskopija koristi svojstva vezanja protutijela s antigenom vizualizirati pojedinih proteina u sekcijama vrlo tanko tkivo . Prvi , antitijela s pričvršćenim zlatnih čestica mogu vezati na antigen od interesa . Elektronskim mikroskopom tada vizualizira čestice zlata , dajući istraživačima sliku gdje se protein je lokaliziran u ćeliji .

Iako imuno - elektronskog mikroskopa je jednostavna u teoriji , to je tehnički teško i vrlo skupo zaposliti , ograničavajući njegova popularnost upotrebe u mnogim biološkim istraživačkih programa .