TPA Pročišćavanje Protokoli
Ovaj protokol je korišten u ispitivanjima fibrinolize , proces nego proizvod koagulacije nazivom fibrina , povezano sa stvaranjem tumora . Tehničara ekstrakt TPA iz aceton - osuši svinjskog bubrega s kalijevim acetatom pufera , pri pH 4,2 . Zatim su dodati amonijev sulfat da se potakne taloženje stanica . Dodaju n - butil - Sepharose uzorcima , koji su zatim analizirani na chromatographer . Konkanavalin A također je dodao i chromatograph.y odvajanje različitih proteina se izvodi .
Pročišćavanje TPA od jajnih stanica kineskog hrčka i E. coli stanice
Protein čistoća važan faktor u uspjehu bioloških eksperimenata . Pročišćeni TPA je komercijalno dostupan , čime se štedi vrijeme i izbjegavaju rizik od ugrožavanja pokusa zbog loše pročišćene otopine . Ovaj protokol uključuje procese pročišćavanja TPA u sisavca i bakterijske stanice . Tehničari taloži uzorke stanica , filtrirati ih i obavljaju afinitet i gel kromatografije. Kasnije , oni analizirati i usporediti rezultate , prije komercijalne proizvodnje .
Izraz aktivnog Human TPA u E. coli
pojasnio stanični lizati su dodane lizin - Sepharose kolone , analizirana u chromatographer i ispere s otopinom natrijevog klora . Drugi uzorak je napunjen na drugom kromatografsku kolonu koja sadrži proteine koji se veže na TPA s vrlo visokim afinitetom . Uzorak od drugog stupca se pomiješa s otopinom od cink - sefaroza . Dobiveni protein pokazuje više od 90 posto čistoće , prema časopisu " Applied and Environmental Microbiology . "