TMRE Protokol

tctramctilrodamin etil ( TMRE ) je" spor , lipofilan , kationski fluorescentno reditribution boja" koristi u MitoPT ™ TMRE /TMRM mitohondrijske potencijal membrane Kit procjeni , proizveden od strane imunokemiji Technologies, LLC . Proces pomaže kako bi vidjeli transmembransku električne potencijalni gradijent u stanicama . Priprema za test

protokol je jednostavno slijediti , a traje oko 20 minuta da se obraditi na 37 stupnjeva Celzija . Žive stanice korištene u pokusu može potrajati nekoliko sati i nekoliko dana da se pripremi za upotrebu . Kontrolne stanice mogu potrajati nekoliko sati za pripremu , kao što im je potrebno kako bi se inducirati apoptozu .
Protokola Part 1

Kultura stanica u optimalne gustoće za apoptoze ili oksidativni stres indukcija , u skladu s vašim specifičnim indukcije protokol , ali da ne prelazi 10 ( 6 ) stanica /mL .
Protokol Part 2

naisti vrijeme , kultura ne inducirana stanična populacijanegativna kontrola ( na istoj gustoći kao inducirane stanovništva .
Protokol 3. dio

aktiviranje apoptoze ili namjerno depolarize mitohondrija slijedeće željeni protokol .
protokol 4. dio

Pripremite 1X Assay /pranje Buffer .
protokol dijelovi 5-8

Pripremite 1 mm ili 0,2 mM MitoPT ™ TMRE /TMRM dionica . Jer Protokola Part 6 , pripremu razrjeđenja 1:100 od 1 mm, ili 01:20 razvodnjavanje 0,2 mM MitoPT ™ TMRE /TMRM rješenje za ubacuju u stanične uzorke kulture .

Protokola dijelu 7 , mrlja stanice korištenjem konačnu 20-200 nM koncentraciju MitoPT ™ TMRE /TMRM rješenje .

Protokola poglavlju 8 , analizirati podatke .