Prednosti neizravne u odnosu na izravnu imunofluorescenciju?
Poboljšana osjetljivost:
- Korištenje sekundarnih protutijela u neizravnoj imunofluorescenciji pojačava signal, što rezultira povećanom osjetljivošću. Sekundarna protutijela obično su konjugirana s višestrukim fluorescentnim molekulama, što omogućuje otkrivanje čak i malih količina primarnih protutijela vezanih na ciljni antigen.
Specifičnost:
- Indirektna metoda smanjuje mogućnost nespecifičnog vezanja primarnih protutijela na stanične komponente. To je zato što se sekundarna antitijela stvaraju protiv primarnih antitijela, osiguravajući da ona specifično prepoznaju i vežu se samo na primarna antitijela vezana na ciljni antigen.
Svestranost:
- Neizravna imunofluorescencija omogućuje upotrebu različitih sekundarnih antitijela konjugiranih na različite fluorescentne boje, pružajući svestranost u eksperimentalnom dizajnu. Istraživači mogu odabrati odgovarajuće sekundarno protutijelo na temelju željene valne duljine emisije, što omogućuje višestruku analizu i istovremeno otkrivanje višestrukih antigena.
Pojačanje signala:
- Neizravna imunofluorescencija omogućuje pojačanje signala upotrebom sekundarnih antitijela konjugiranih na više fluorescentnih molekula. Ovo pojačanje povećava svjetlinu fluorescentnog signala i olakšava detekciju slabo izraženih antigena.
Isplativost:
- Neizravna imunofluorescencija može biti isplativija u usporedbi s izravnom imunofluorescencijom. Proizvodnja primarnih antitijela često zahtijeva više resursa, dok se sekundarna antitijela mogu proizvesti i dobiti lakše, potencijalno smanjujući ukupne troškove testa.
Primjenjivost na različite vrste uzoraka:
- Izravna imunofluorescencija obično uključuje obilježavanje antitijela fluoroforom, što može promijeniti svojstva vezanja i specifičnost antitijela. Neizravna imunofluorescencija omogućuje označavanje samo sekundarnog antitijela, smanjujući rizik od utjecaja na interakcije primarnog antitijela.
Omjer signala i šuma:
- Neizravna imunofluorescencija daje bolji omjer signala i šuma u usporedbi s izravnom imunofluorescencijom. Upotreba sekundarnih protutijela omogućuje eliminaciju pozadinske fluorescencije koja može nastati zbog nespecifičnog vezanja primarnih protutijela na stanične komponente.
