TPA Pročišćavanje Protokoli

Aktivator tkivnog plazminogena ili TPA je vrsta serin proteaze , koji je u stanju da se uništi protein krvnih ugrušaka . TPA nalazi u stanicama koje interno pokrivaju krvne žile . TPA protokoli su dio farmaceutskog i medicini na udarce , te bolesti srca i pluća , kao što je plućna embolija i infarkt miokarda . Pročišćavanje TPA odnosi na izolaciju te proteina iz drugih molekula nizom postupaka , uključujući kromatografijom i elektroforezom . Pročišćavanje s TPA Hog bubrega

Ovaj protokol je korišten u ispitivanjima fibrinolize , proces nego proizvod koagulacije nazivom fibrina , povezano sa stvaranjem tumora . Tehničara ekstrakt TPA iz aceton - osuši svinjskog bubrega s kalijevim acetatom pufera , pri pH 4,2 . Zatim su dodati amonijev sulfat da se potakne taloženje stanica . Dodaju n - butil - Sepharose uzorcima , koji su zatim analizirani na chromatographer . Konkanavalin A također je dodao i chromatograph.y odvajanje različitih proteina se izvodi .
Pročišćavanje TPA od jajnih stanica kineskog hrčka i E. coli stanice

Protein čistoća važan faktor u uspjehu bioloških eksperimenata . Pročišćeni TPA je komercijalno dostupan , čime se štedi vrijeme i izbjegavaju rizik od ugrožavanja pokusa zbog loše pročišćene otopine . Ovaj protokol uključuje procese pročišćavanja TPA u sisavca i bakterijske stanice . Tehničari taloži uzorke stanica , filtrirati ih i obavljaju afinitet i gel kromatografije. Kasnije , oni analizirati i usporediti rezultate , prije komercijalne proizvodnje .
Izraz aktivnog Human TPA u E. coli

pojasnio stanični lizati su dodane lizin - Sepharose kolone , analizirana u chromatographer i ispere s otopinom natrijevog klora . Drugi uzorak je napunjen na drugom kromatografsku kolonu koja sadrži proteine ​​koji se veže na TPA s vrlo visokim afinitetom . Uzorak od drugog stupca se pomiješa s otopinom od cink - sefaroza . Dobiveni protein pokazuje više od 90 posto čistoće , prema časopisu " Applied and Environmental Microbiology . "